Čo je PCR test? Povedzme si to jednoducho!

Keď počujeme slovo PCR, predstavíme si pandémiu Covidu, však? Časy, keď sme si museli strčiť výter z nosa a čakať na správu... na to nikdy nezabudneme. Vedeli ste však, že PCR sa nepoužíva len na detekciu Covidu? Je to v skutočnosti veľmi dôležitý test, ktorý priniesol obrovský prielom v lekárskej vede. Dnes si teda povieme, čo je tento PCR test, čo ďalšie dokáže zistiť a ako funguje, a to jednoduchým spôsobom, ktorému môžete porozumieť.

Čo je to jednoducho PCR?

Dobre, povedzme si to takto. Predstavte si, že by ste museli nájsť jediné slovo na jednej strane jednej knihy z tisícov kníh vo veľkej knižnici. Aké ťažké by to bolo? Je to ako nájsť malý kúsok DNA alebo RNA , genetického materiálu vo vnútri buniek v našich telách.

Technológia PCR (polymerázová reťazová reakcia) túto náročnú úlohu uľahčuje. Vďaka nej sa najmenší kúsok DNA alebo RNA, ktorý hľadáme, skopíruje stotisíce, ba až milióny krát (amplifikácia). Je to ako keby sme našli stránku s daným slovom v knihe z knižnice, vložili ju do kopírky a urobili približne milión kópií. Keďže toto ťažko dostupné slovo je teraz všade, vieme ho ľahko identifikovať.

Jednoducho povedané, PCR je test, ktorý odoberie veľmi malé množstvo bunky z nášho tela, kvapku krvi alebo výter z nosa a v laboratóriu do nej umelo vypestuje špecifický kúsok DNA alebo RNA, aby sa potvrdilo, či je prítomný v našej vzorke alebo nie. Ide o veľmi citlivý test. To znamená, že dokáže detegovať aj veľmi malé množstvá vírusu. Táto metóda patrí do skupiny testov nazývaných test amplifikácie nukleových kyselín (NAAT).

Aké choroby sa dajú zistiť pomocou PCR testu?

Hoci sa PCR stala populárnou kvôli pandémii COVID, v medicíne sa používa už desaťročia. Týmto testom sa dá zistiť veľa vecí. Pozrime sa na niektoré z hlavných.

Ako sa odoberá vzorka na PCR test?

Spôsob odberu vzorky na PCR test závisí od druhu ochorenia, ktoré hľadáte. Metóda odberu vzorky je pre každé ochorenie iná.

Väčšinou sa na PCR test nemusíte pripravovať nič špeciálne. V niektorých prípadoch, napríklad pri biopsii, vám však lekár vopred poskytne potrebné pokyny.

Ako funguje PCR technológia?

Dobre, teraz sa pozrime, ako táto úžasná technológia v skutočnosti funguje. Je to trochu vedecké, ale vysvetlím to jednoducho.

1. Príprava vzorky: Najprv sa z odobratej vzorky (krv, sekréty atď.) izoluje DNA alebo RNA.

2. Príprava zmesi: Táto izolovaná DNA/RNA sa potom zmieša s niekoľkými špeciálnymi chemikáliami. Hlavnou zložkou tejto zmesi je enzým nazývaný DNA polymeráza . To je hlavná zložkou, ktorá vykonáva fotokopírovaciu prácu.

3. Cyklus ohrevu a chladenia: Teraz sa malá skúmavka s touto zmesou umiestni do špeciálneho zariadenia. Toto zariadenie veľmi rýchlo zvyšuje a znižuje teplotu.

• Denaturácia: Najprv sa teplota zvýši na približne 95 stupňov Celzia. To spôsobí oddelenie dvoch vlákien DNA.
• Žíhanie: Následne sa teplota zníži na približne 14 stupňov Celzia. Na oddelené vlákna DNA sa potom pripoja malé kúsky DNA (primery), ktoré zodpovedajú hľadanému fragmentu DNA.
• Opätovné zahriatie (predĺženie): Potom sa teplota zvýši na približne 22 stupňov Celzia. Potom vstupuje do hry enzým DNA polymeráza a z tohto primeru vytvorí nový reťazec DNA, ktorý sa zhoduje s pôvodným reťazcom DNA.

4. Kopírovanie: Teraz boli vytvorené dve kópie jedného vlákna DNA. Tento teplotný cyklus sa opakuje približne 30 – 40-krát. V jednom cykle sa množstvo DNA zdvojnásobí. Z dvoch sa stanú štyri, zo štyroch osem, z ôsmich šestnásť... Po približne 30 cykloch sa z pôvodného jedného kúska DNA vytvorí viac ako miliarda kópií.

Teraz sa tento fragment DNA/RNA, ktorý bol predtým príliš malý na detekciu, stal dostatočne veľkým na to, aby sa dal ľahko detekovať.

Existujú rôzne druhy PCR testov?

Áno, existujú hlavne dva typy, o ktorých si musíme byť vedomí.

• PCR s reverznou transkriptázou (RT-PCR): Niektoré vírusy, ako napríklad Covid, chrípka a HIV, majú svoju genetickú informáciu v RNA a nie v DNA. Bežná PCR dokáže kopírovať iba DNA. Pri RT-PCR sa teda najprv použije špeciálny enzým („reverzná transkriptáza“) na „premenu“ tejto RNA na DNA. Výsledná DNA sa nazýva komplementárna DNA (cDNA). Potom prebieha bežný proces PCR.

• PCR v reálnom čase / Kvantitatívna PCR (Q-PCR): Ide o o niečo pokročilejšiu metódu. Pri kopírovaní DNA sa na ňu pripojí fluorescenčná značka. S rastúcim množstvom kopírovanej DNA sa zvyšuje aj táto fluorescencia. Prístroj dokáže túto fluorescenciu merať. Takže kým čakáme, teda v reálnom čase , môžeme vidieť, či je príslušná DNA vo vzorke prítomná alebo nie. Nielen to, ale môže tiež poskytnúť približnú predstavu o tom, koľko vírusu bolo v pôvodnej vzorke (vírusová záťaž). Na detekciu Covidu sa často používa test RT-PCR v reálnom čase , ktorý kombinuje obe tieto metódy.

Čo znamená PCR správa?

Je veľmi dôležité porozumieť PCR správe, keď ju dostanete.

• Zistené / Pozitívne: Ak vaša správa uvádza „Zistené“ alebo „Pozitívne“, znamená to, že vaša vzorka obsahovala časti vírusu alebo genetického materiálu, ktorý hľadali. Jednoducho povedané, pravdepodobne máte infekciu.

• Nedetekované / Negatívne: To znamená, že relevantné fragmenty DNA/RNA sa v testovanej vzorke nenašli. To znamená, že s najväčšou pravdepodobnosťou danú infekciu nemáte.

Dĺžka trvania výsledkov sa líši v závislosti od vykonávaného testu. Výtery z nosa (ako napríklad pri COVID-19, chrípke) zvyčajne poskytujú výsledky do 24 hodín. Krvné testy a biopsie na hľadanie genetických ochorení však môžu trvať týždeň alebo dlhšie.

Ak máte akékoľvek otázky alebo obavy týkajúce sa PCR testu alebo jeho výsledkov, určite sa o tom porozprávajte so svojím lekárom.