Давайте дізнаємося про ПЛР-тест просто, як від друга!

Ви, можливо, пам'ятаєте, що під час пандемії Covid-19 ми всі говорили про ПЛР-тест . Дехто, мабуть, трохи злякався, думаючи про паличку, яку вставляють у ніс. Але що ж таке цей ПЛР-тест? Чи може він виявити лише Covid-19? Ні, ПЛР — це дуже важливий метод тестування в медицині, який допомагає в багатьох речах. Давайте поговоримо про все це сьогодні, просто та зрозуміло, ніби ми розмовляємо з добрим другом.

Що таке ПЛР? Чи можете ви трохи пояснити?

Простіше кажучи, ПЛР – це абревіатура від полімеразна ланцюгова реакція . Вона використовується для виявлення генетичного матеріалу в нашому організмі, ДНК або РНК . Уявіть собі невеликий зразок, взятий у вас, це може бути крапля крові або мазок з внутрішньої сторони вашого носа. Цей крихітний шматочок ДНК або РНК у цьому зразку береться, і в лабораторії створюються мільйони, можливо, мільярди копій. Це те, що вчені називають ампліфікацією , що означає «збільшення» або «множення». Це як робити багато копій одного аркуша паперу за допомогою копіювального апарату.

Створюючи багато таких копій, вченим стає легше вивчати ДНК або РНК у вихідному невеликому зразку та бачити, чи є в ньому щось особливе. ПЛР належить до групи тестів, які називаються тестами ампліфікації нуклеїнових кислот (NAAT) .

Хоча багато людей чули слово ПЛР у зв'язку з тестуванням на Covid-19, ця технологія використовується в медичній сфері вже давно і є дуже корисним методом.

Що можна виявити за допомогою ПЛР?

Тепер давайте подивимося, що може виявити цей ПЛР-тест. Багато людей думають, що він призначений лише для Covid-19. Але це не так. Погляньте:

• Інфекційні захворювання: ПЛР може допомогти визначити, чи спричинена у вас лихоманка, застуда або кашель вірусом , бактеріями , грибком чи паразитом . Наприклад:
• Вірус SARS-CoV-2 , що викликає COVID-19 (COVID-19) .
• Грип , саме так ми зазвичай називаємо грип.
• Респіраторно-синцитіальний вірус (РСВ), який особливо поширений у маленьких дітей.
• Бактерії, що викликають туберкульоз.
• Багато інших вірусних та бактеріальних інфекцій.
• Генетичні захворювання: У деяких людей є генетичні захворювання, які передаються у спадок, чи не так? Такі захворювання, наприклад , муковісцидоз.Ця ПЛР також використовується для діагностики таких станів, як хвороба Хантінгтона та синдром ламкої Х-хромосоми . Це дуже складні стани, тому раннє виявлення дуже важливе для лікування.
• Види раку: Цей метод також допомагає виявити певні види раку, такі як лімфома .
• Зміни генів при раку: Під час лікування людини з раком цей ПЛР-тест також може виявити специфічні варіації/мутації генів у цих ракових клітинах. Це дозволить використовувати цілеспрямовану терапію, спрямовану на ці конкретні зміни. Це є важливим досягненням у галузі лікування раку.
• Ризик захворювання в майбутньому: Люди з певними генетичними змінами можуть мати підвищений ризик розвитку серйозних захворювань, таких як рак, у майбутньому. Ця ПЛР також використовується для генетичного тестування на ризик раку . Це дозволяє вам бути обізнаним заздалегідь та вносити зміни до способу життя, якщо необхідно, або залишатися пильним, регулярно проходячи обстеження.
• Пренатальне тестування: ПЛР також корисна в тестах, що проводяться для виявлення генетичного захворювання у ненародженої дитини вагітної жінки.

Не тільки це, ви, можливо, бачили це у фільмах, де беруть докази ДНК, такі як крихітна волосина або пляма крові, знайдені на місці злочину, та використовують для ідентифікації злочинця. Судово-медичні лабораторії також використовують цю технологію ПЛР для збільшення кількості ДНК та проведення тестів.

Які тести та методи використовують технологію ПЛР?

Технологія ПЛР використовується в різних методах тестування. Тип тесту, для якого потрібно взяти зразок, залежатиме від того, на що ви тестуєте. Ось кілька прикладів:

• Аналізи крові: береться зразок крові, і ПЛР використовується для виявлення генетичних змін та деяких інфекційних захворювань.
• Мазок з носоглотки: зразок слизу, взятий з внутрішньої частини носа або горла, може бути використаний для тестування на респіраторні інфекції, такі як грип, COVID-19 та РСВ. Саме з цим ми всі стикалися під час COVID.
• Передімплантаційна генетична діагностика (ПГД) або передімплантаційний генетичний скринінг (ПГС): під час процесу екстракорпорального запліднення (ЕКЗ) у ембріонів беруть кілька клітин та тестують на генетичні захворювання, перш ніж їх імплантують у матку матері. Зазвичай це роблять через кілька днів після отримання яйцеклітин.
• Амніоцентез:Під час вагітності невелика кількість навколоплідних вод, що оточують дитину в утробі матері, може бути використана для перевірки генетичного статусу дитини за допомогою ПЛР. Це тест, який проводить лікар-спеціаліст.
• Біопсія: Для виявлення генетичних мутацій у ракових клітинах (молекулярне тестування) береться невеликий зразок пухлини (біопсія пухлини) або біопсія кісткового мозку. Це схоже на незначну хірургічну операцію. Потім зразок використовується для проведення ПЛР для пошуку генетичних змін.

Як ви готуєтеся до цього тесту?

У більшості випадків для ПЛР-тесту не потрібна спеціальна підготовка. Однак, це залежить від того, на що ви тестуєтеся та який метод використовується для збору зразка. Наприклад, деякі аналізи крові можуть вимагати від вас голодування протягом кількох годин перед цим. Тому краще запитати у свого лікаря або в закладі тестування, чи потрібно вам робити щось особливе.

Як працює ПЛР? Трохи науки!

Це дещо наукова історія, але дозвольте мені пояснити її просто. ПЛР ідентифікує послідовність, унікальну для ДНК, яку ви хочете знайти, тобто специфічну для неї. Ця послідовність може бути специфічною генетичною зміною в раку або генетичним кодом вірусу чи бактерії. Це називається цільовою ДНК .

Назва «Полімеразна ланцюгова реакція» стосується процесу, за допомогою якого в лабораторії створюється (ампліфікується) велика кількість копій цільової ДНК. У цьому процесі використовується фермент під назвою ДНК-полімераза . Цей фермент створює копії цільової ДНК, якщо вона присутня у зразку.

Ця «ланцюгова реакція» відбувається, коли розчин проходить багато циклів нагрівання та охолодження. За один цикл кількість ДНК може подвоїтися. Уявіть собі це як один до двох, два до чотирьох, чотири до восьми... і так далі, зрештою утворюючи мільйони копій. Перевага цього полягає в тому, що ПЛР може виявити навіть невеликі кількості ДНК або РНК, які інакше були б пропущені іншими тестами.

Часто після проведення ПЛР вченим доводиться проводити додаткові тести для аналізу ампліфікованої ДНК. Але іноді під час процесу ПЛР до розчину додають спеціальні мітки, які можуть визначити, чи є зразок позитивним чи негативним. Цей метод можна використовувати для швидкого отримання результатів, особливо при пошуку інфекцій, таких як віруси.

Які види ПЛР існують?

Існують різні типи ПЛР. Деякі вимагають додаткових кроків для копіювання або аналізу ДНК. Розглянемо два основні типи:

1. ПЛР зі зворотною транскриптазою (RT-PCR)

Уявіть, що генетична інформація, яку ми хочемо скопіювати та знайти, знаходиться не в ДНК, а в РНК. (Наприклад, вірус Covid-19 має РНК). Потім, у цій ПЛР у реальному часі (RT-PCR ), РНК (РНК) спочатку перетворюється на ДНК за допомогою спеціального ферменту (зворотної транскриптази). ДНК, що утворюється, називається комплементарною ДНК (кДНК) . Після цього виконується звичайний процес ПЛР, згаданий раніше. Тому що звичайну ПЛР можна провести лише на ДНК.

2. ПЛР у реальному часі / Кількісна ПЛР (Q-ПЛР)

У цьому випадку під час створення копій ДНК до них додаються спеціальні флуоресцентні мітки . Ці мітки випромінюють світло, коли зв'язуються з цільовою ДНК. Тоді, без додаткового тестування, ті, хто проводить тест, можуть у режимі реального часу побачити, чи присутня відповідна ДНК у зразку. Більше того, вони також можуть отримати кількісне уявлення про її кількість.

Найзаплутаніше те, що деякі люди також називають це "RT-PCR". Але це не те саме, що ПЛР зі зворотною транскриптазою, згадана раніше. Також цей метод ПЛР у реальному часі можна використовувати в поєднанні з ПЛР зі зворотною транскриптазою, згаданою раніше. Тоді це називається RT-PCR (RT-PCR у реальному часі) . Цей метод RT-PCR використовується для тестування мазків з носа для виявлення РНК-вірусів, таких як Covid-19 та грип.

Що нам кажуть результати ПЛР-тесту?

Коли ви отримаєте результати ПЛР-тесту, формулювання може дещо відрізнятися залежно від того, на що вас тестували.

• Зазвичай, якщо ваш результат показує «виявлено» або «присутній», це означає, що у вас є генетична мутація або інфекція, яку шукав тест.
• Якщо результат показує «не виявлено», це означає, що тест не зміг знайти цільову ДНК або РНК, яка тестувалася. Однак, у випадку інфекції, це іноді може означати, що ви провели тестування занадто рано на стадії інфекційного процесу. У вас все ще може бути інфекція, але на той момент може бути недостатньо вірусу або бактерій для виявлення за допомогою ПЛР.

Як інтерпретувати результати ПЛР на Covid-19?

Це те, з чим зараз знайомі багато людей.

• Позитивний результат ПЛР на COVID – тобто у вашому звіті зазначено «Виявлено» – означає, що ви , ймовірно, інфіковані COVID-19 або нещодавно одужали від COVID-19 (іноді ПЛР може залишатися позитивним протягом деякого часу після одужання).
• Якщо ви отримали негативний результат ПЛР на COVID («Не виявлено»), це означає, що у вас, найімовірніше, не було COVID-19, коли ви брали мазок з носа. Однак, як я вже згадував раніше, іноді на ранніх стадіях інфекції, особливо якщо у вас немає симптомів, ПЛР-тести можуть бути негативними. Тому, якщо у вас є симптоми, ваш лікар може порадити вам пройти повторне обстеження через кілька днів.

Скільки часу потрібно, щоб отримати результати ПЛР?

Це також залежить від проведеного тесту.

• Тести назального мазка на поширені віруси, такі як грип та COVID-19, зазвичай потребують кількох годин або дня, щоб отримати результати.
• Генетичні тести, що використовують аналізи крові та методи біопсії, можуть тривати тиждень або більше , щоб отримати результати, оскільки процес аналізу дещо складніший.

Коли потрібно звернутися до лікаря?

Якщо у вас є будь-які запитання чи занепокоєння щодо ПЛР-тесту або його результатів, обов’язково поговоріть зі своїм лікарем. Він зможе вам усе пояснити.

Найважливіше послання, яке потрібно взяти додому

Хоча слова «ПЛР-тест» раптово увійшли в нашу щоденну розмову з пандемією COVID-19 2020 року, насправді це дуже цінна технологія, яку лікарі використовують десятиліттями. ПЛР допомагає ідентифікувати та копіювати крихітні кількості ДНК або РНК, які можна використовувати для діагностики різноманітних захворювань.

Хоча для лікарів це поширена практика, для вас може бути незвичним проходити тест. Ми це розуміємо. Але найкраще те, що для цього потрібен лише невеликий зразок вашого тіла, і процедура зазвичай займає лише кілька хвилин. Якщо у вас є якісь запитання, занепокоєння чи сумніви з цього приводу, будь ласка, зверніться до свого лікаря. Він все вам пояснює. Будьте здорові!

ПЛР -тест, ДНК, РНК, генетичне тестування, діагностика, Covid-19, вірус