Šta je PCR test? Hajde da o tome jednostavno pričamo!

Kada čujemo riječ PCR, pomislimo na pandemiju Covida, zar ne? Vrijeme kada smo morali staviti bris u nos i čekati izvještaj... to se nikada neće zaboraviti. Ali jeste li znali da se PCR ne koristi samo za otkrivanje Covida? Ovo je zapravo vrlo važan test koji je napravio ogroman proboj u medicinskoj nauci. Dakle, danas ćemo razgovarati o tome šta je ovaj PCR test, šta još može otkriti i kako funkcionira na jednostavan način koji možete razumjeti.

Šta je PCR ukratko?

U redu, recimo to ovako. Zamislite da morate pronaći jednu riječ na jednoj stranici jedne knjige, od hiljada knjiga u velikoj biblioteci. Koliko bi to bilo teško? To je kao da pronađete sićušan dio DNK ili RNK , genetskog materijala unutar ćelija u našim tijelima.

PCR (lančana reakcija polimeraze) tehnologija olakšava taj težak zadatak. Ono što ona radi jeste da kopira najmanji dio DNK ili RNK koji tražimo stotine hiljada, čak i milione puta (amplifikacija). To je kao da pronađete stranicu sa tom riječju u bibliotečkoj knjizi, stavite je u fotokopir aparat i napravite oko milion kopija. Zatim, budući da je ta teško dostupna riječ sada svuda, možemo je lako identificirati.

Jednostavno rečeno, PCR je test koji uzima vrlo malu količinu ćelije iz našeg tijela, kap krvi ili bris nosa, i vještački uzgaja specifičan dio DNK ili RNK u njoj u laboratoriji kako bi se potvrdilo da li je prisutan u našem uzorku ili ne. Ovo je vrlo osjetljiv test. To znači da može otkriti čak i vrlo male količine virusa. Ova metoda pripada grupi testova pod nazivom Test amplifikacije nukleinskih kiselina (NAAT).

Koje bolesti se mogu otkriti PCR testiranjem?

Iako je PCR postao popularan zbog pandemije COVID-a, u medicinskom svijetu se koristi već decenijama. Mnogo je stvari koje se mogu otkriti ovim testom. Pogledajmo neke od glavnih.

Kako se uzima uzorak za PCR test?

Način uzimanja uzorka za PCR test zavisi od vrste bolesti koju tražite. Metoda uzimanja uzorka je različita za svako stanje.

U većini slučajeva, ne morate učiniti ništa posebno da biste se pripremili za PCR test. Međutim, u nekim slučajevima, kao što je biopsija, vaš ljekar će vam unaprijed dati potrebna uputstva.

Kako PCR tehnologija funkcioniše?

U redu, sada da vidimo kako ova nevjerovatna tehnologija zapravo funkcioniše. Ovo je malo naučno, ali objasniću to jednostavno.

1. Priprema uzorka: Prvo se DNK ili RNK izoluje iz uzorka (krv, sekreti itd.) uzetog od vas.

2. Pravljenje smjese: Zatim se ova izolovana DNK/RNK miješa sa nekim posebnim hemikalijama. Glavna stvar u ovoj smjesi je enzim koji se zove DNK polimeraza . To je glavni enzim koji obavlja posao fotokopiranja.

3. Ciklus zagrijavanja i hlađenja: Sada se mala epruveta sa ovom smjesom stavlja u posebnu mašinu. Ova mašina vrlo brzo podiže i snižava temperaturu.

• Denaturacija: Prvo se temperatura povećava na oko 95 stepeni Celzijusa. To uzrokuje razdvajanje dva lanca DNK.
• Žarenje: Zatim se temperatura snižava na oko 14 stepeni Celzijusa. Nakon toga, mali komadići DNK (prajmeri) koji odgovaraju fragmentu DNK koji tražimo pričvršćuju se na odvojene lance DNK.
• Ponovno zagrijavanje (ekstenzija): Zatim se temperatura podiže na oko 22 stepena Celzijusa. Tada nastupa enzim DNK polimeraza i stvara novi lanac DNK iz tog primera koji odgovara originalnom lancu DNK.

4. Kopiranje: Sada su napravljene dvije kopije jednog lanca DNK. Ovaj temperaturni ciklus se ponavlja oko 30-40 puta. U jednom ciklusu, količina DNK se udvostručuje. Dvije postaju četiri, četiri postaju osam, osam postaje šesnaest... Nakon otprilike 30 ciklusa, od originalnog jednog dijela DNK napravljeno je više od milijardu kopija.

Sada je taj DNK/RNK fragment, koji je ranije bio premalen za detekciju, postao dovoljno velik da se lako detektuje.

Postoje li vrste PCR testova?

Da, postoje uglavnom dvije vrste kojih moramo biti svjesni.

• PCR s reverznom transkriptazom (RT-PCR): Neki virusi, poput Covida, gripe i HIV-a, imaju svoje genetske informacije u RNK, a ne u DNK. Normalni PCR može kopirati samo DNK. Dakle, ono što radite u RT-PCR-u je da prvo koristite poseban enzim ("reverzna transkriptaza") da biste "pretvorili" tu RNK u DNK. Rezultirajuća DNK se naziva komplementarna DNK (cDNK). Zatim se odvija normalan PCR proces.

• PCR u realnom vremenu / Kvantitativna PCR (Q-PCR): Ovo je nešto naprednija metoda. Ono što se dešava u ovoj metodi je da se, kako se DNK kopira, na nju veže fluorescentna oznaka. Kako se količina kopirane DNK povećava, povećava se i ova fluorescencija. Mašina može mjeriti ovu fluorescenciju. Dakle, dok čekamo, odnosno u realnom vremenu , možemo vidjeti da li je relevantna DNK prisutna u uzorku ili ne. Ne samo to, već može dati i okvirnu predstavu o tome koliko je virusa bilo u originalnom uzorku (virusno opterećenje). RT-PCR test u realnom vremenu koji kombinuje obje ove metode često se koristi za otkrivanje Covida.

Šta znači PCR izvještaj?

Veoma je važno razumjeti PCR izvještaj kada ga primite.

• Detektovano / Pozitivno: Ako u vašem izvještaju piše "Detektovano" ili "Pozitivno", to znači da je vaš uzorak sadržavao dijelove virusa ili genetskog materijala koji su tražili. Jednostavno rečeno, vjerovatno imate infekciju.

• Nije detektovano / Negativno: Ovo znači da relevantni fragmenti DNK/RNK nisu mogli biti pronađeni u testiranom uzorku. To znači da najvjerovatnije nemate tu infekciju.

Koliko je vremena potrebno da se dobiju rezultati varira ovisno o testu koji se radi. Brisevi nosa (kao što su COVID, gripa) obično daju rezultate u roku od 24 sata. Međutim, analize krvi i biopsije za traženje genetskih bolesti mogu potrajati sedmicu ili više.

Ako imate bilo kakvih pitanja ili nedoumica u vezi s PCR testom ili njegovim rezultatima, obavezno razgovarajte sa svojim ljekarom o tome.