Mis on PCR-test? Räägime sellest lihtsalt!

Kui kuuleme sõna PCR, siis meenub meile koroonapandeemia, eks? Aeg, mil pidime ninna tampooni toppima ja raportit ootama... seda ei unustata kunagi. Aga kas teadsite, et PCR-i ei kasutata ainult koroona avastamiseks? See on tegelikult väga oluline test, mis on teinud meditsiiniteaduses tohutu läbimurde. Seega räägime täna sellest, mis see PCR-test on, mida veel saab tuvastada ja kuidas see töötab lihtsal ja arusaadaval viisil.

Mis on PCR lihtsalt öeldes?

Olgu, ütleme nii. Kujutage ette, et peate leidma üheainsa sõna üheainsa raamatu ühelt lehelt tuhandete raamatute hulgast suures raamatukogus. Kui keeruline see küll oleks? See on nagu pisikese DNA või RNA tüki leidmine, geneetilise materjali leidmine meie keha rakkudes.

PCR (polümeraasi ahelreaktsiooni) tehnoloogia muudab selle keerulise ülesande lihtsamaks. See kopeerib otsitava DNA või RNA väikseima tüki sadu tuhandeid, isegi miljoneid kordi (amplifikatsioon). See on nagu raamatukoguraamatust sõnaga lehe leidmine, selle kopeerimine ja umbes miljoni koopia tegemine. Seejärel, kuna see raskesti leitav sõna on nüüd kõikjal, saame selle hõlpsalt tuvastada.

Lihtsamalt öeldes on PCR test, mille käigus võetakse meie kehast väga väike kogus rakku, tilk verd või ninaproov, ja laboris kasvatatakse selles kunstlikult spetsiifiline DNA või RNA tükk, et kinnitada, kas see on meie proovis või mitte. See on väga tundlik test. See tähendab, et see suudab tuvastada isegi väga väikeseid viiruse koguseid. See meetod kuulub testide rühma, mida nimetatakse nukleiinhappe amplifikatsioonitestiks (NAAT).

Milliseid haigusi saab PCR-testiga tuvastada?

Kuigi PCR on COVID-pandeemia tõttu populaarseks muutunud, on seda meditsiinimaailmas kasutatud aastakümneid. Selle testiga saab tuvastada palju asju. Vaatame mõnda peamist neist.

Kuidas PCR-testi jaoks proovi võtta?

PCR-testi jaoks proovi võtmise viis sõltub sellest, millist haigust otsite. Proovi võtmise meetod on iga seisundi puhul erinev.

Enamasti ei pea PCR-testiks valmistumiseks midagi erilist tegema. Mõnel juhul, näiteks biopsia sarnase protseduuri tegemisel, annab arst teile eelnevalt vajalikud juhised.

Kuidas PCR-tehnoloogia töötab?

Olgu, vaatame nüüd, kuidas see hämmastav tehnoloogia tegelikult töötab. See on natuke teaduslik, aga ma selgitan seda lihtsalt.

1. Proovi ettevalmistamine: Esmalt eraldatakse teilt võetud proovist (veri, eritised jne) DNA või RNA.

2. Segu valmistamine: Seejärel segatakse see eraldatud DNA/RNA spetsiaalsete kemikaalidega. Selle segu peamine koostisosa on ensüüm nimega DNA polümeraas . See on peamine ensüüm, mis teeb kopeerimistööd.

3. Kuumutamise ja jahutamise tsükkel: Nüüd asetatakse seguga väike tuub spetsiaalsesse masinasse. See masin tõstab ja langetab temperatuuri väga kiiresti.

• Denatureerimine: Esiteks tõstetakse temperatuur umbes 95 kraadini Celsiuse järgi. See põhjustab kahe DNA ahela eraldumise.
• Lõõmutamine: Seejärel alandatakse temperatuur umbes 55 kraadini. Seejärel kinnitatakse eraldatud DNA ahelatele väikesed DNA tükid (praimerid), mis sobivad otsitava DNA fragmendiga.
• Ülessoojendamine (pikendamine): Seejärel tõstetakse temperatuur umbes 72 kraadini. Seejärel siseneb DNA polümeraasi ensüüm ja loob sellest praimerist uue DNA ahela, mis sobib algse DNA ahelaga.

4. Kopeerimine: Nüüd on ühest DNA ahelast tehtud kaks koopiat. See temperatuurilüngas kordub umbes 30–40 korda. Ühe tsükli jooksul DNA hulk kahekordistub. Kahest saab neli, neljast kaheksa, kaheksast kuusteist... Umbes 30 tsükli järel on algsest ühest DNA tükist tehtud üle miljardi koopia.

Nüüd on see DNA/RNA fragment, mis oli varem liiga väike tuvastamiseks, muutunud piisavalt suureks, et seda oleks lihtne tuvastada.

Kas on olemas erinevat tüüpi PCR-teste?

Jah, on peamiselt kahte tüüpi, millega peame kursis olema.

• Pöördtranskriptaasi PCR (RT-PCR): Mõnedel viirustel, näiteks Covidil, gripil ja HIV-l, on geneetiline teave RNA-s, mitte DNA-s. Tavaline PCR saab kopeerida ainult DNA-d. Seega kasutatakse RT-PCR-is esmalt spetsiaalset ensüümi (pöördtranskriptaasi), et see RNA DNA-ks teisendada. Saadud DNA-d nimetatakse komplementaarseks DNA-ks (cDNA). Seejärel toimub tavaline PCR-protsess.

• Reaalaja PCR / kvantitatiivne PCR (Q-PCR): See on veidi keerukam meetod. Selle käigus kinnitatakse DNA kopeerimisel sellele fluorestseeruv märgis. Kopeeritud DNA hulga suurenedes suureneb ka see fluorestsents. Masin saab seda fluorestsentsi mõõta. Seega, ootamise ajal ehk reaalajas , näeme, kas proovis on vajalik DNA või mitte. Lisaks sellele annab see ka ligikaudse ettekujutuse sellest, kui palju viirust algproovis oli (viiruskoormus). Covidi tuvastamiseks kasutatakse sageli reaalajas RT-PCR testi, mis ühendab mõlemad meetodid.

Mida tähendab PCR-aruanne?

PCR-aruande saamisel on väga oluline sellest aru saada.

• Tuvastatud / positiivne: Kui teie aruandes on kirjas „Tuvastatud” või „Positiivne”, tähendab see, et teie proov sisaldas otsitava viiruse või geneetilise materjali osi. Lihtsamalt öeldes on teil tõenäoliselt nakkus.

• Ei tuvastatud / negatiivne: See tähendab, et testitud proovist ei leitud asjakohaseid DNA/RNA fragmente. See tähendab, et teil tõenäoliselt seda infektsiooni ei ole.

Tulemuste saamise aeg sõltub tehtavast testist. Ninaproovide (nagu COVID, gripp) tulemused saadakse tavaliselt 24 tunni jooksul. Geneetiliste haiguste otsimiseks tehtavad vereanalüüsid ja biopsiad võivad aga võtta nädala või rohkem.

Kui teil on PCR-testi või selle tulemuste kohta küsimusi või muresid, pidage kindlasti nõu oma arstiga.