Što je PCR test? Razgovarajmo o tome jednostavno!

Kad čujemo riječ PCR, pomislimo na pandemiju Covida, zar ne? Vrijeme kada smo morali staviti bris u nos i čekati da stigne izvješće... to se nikada neće zaboraviti. Ali jeste li znali da se PCR ne koristi samo za otkrivanje Covida? Ovo je zapravo vrlo važan test koji je napravio ogroman proboj u medicinskoj znanosti. Stoga ćemo danas razgovarati o tome što je ovaj PCR test, što još može otkriti i kako funkcionira na jednostavan način koji možete razumjeti.

Što je PCR jednostavno rečeno?

U redu, recimo to ovako. Zamislite da morate pronaći jednu riječ na jednoj stranici jedne knjige, od tisuća knjiga u velikoj knjižnici. Koliko bi to bilo teško? To je kao da pronađete sićušan komadić DNK ili RNK , genetskog materijala unutar stanica u našim tijelima.

PCR (lančana reakcija polimeraze) tehnologija olakšava taj težak zadatak. Ono što ona radi jest kopiranje najmanjeg dijela DNK ili RNK koji tražimo stotine tisuća, čak i milijuna puta (amplifikacija). To je kao da pronađemo stranicu s tom riječju u knjižničnoj knjizi, stavimo je u fotokopirni aparat i napravimo oko milijun kopija. Zatim, budući da je ta teško dostupna riječ sada posvuda, možemo je lako identificirati.

Jednostavno rečeno, PCR je test koji uzima vrlo malu količinu stanice iz našeg tijela, kap krvi ili bris nosa, te se u laboratoriju umjetno uzgaja određeni dio DNK ili RNK kako bi se potvrdilo je li prisutan u našem uzorku ili ne. Ovo je vrlo osjetljiv test. To znači da može otkriti čak i vrlo male količine virusa. Ova metoda pripada skupini testova pod nazivom Test amplifikacije nukleinskih kiselina (NAAT).

Koje se bolesti mogu otkriti PCR testiranjem?

Iako je PCR postao popularan zbog pandemije COVID-a, u medicinskom svijetu se koristi već desetljećima. Mnogo je stvari koje se mogu otkriti ovim testom. Pogledajmo neke od glavnih.

Kako se uzima uzorak za PCR test?

Način uzimanja uzorka za PCR test ovisi o vrsti bolesti koju tražite. Metoda uzimanja uzorka razlikuje se za svako stanje.

Većinom ne morate učiniti ništa posebno za pripremu za PCR test. Međutim, u nekim slučajevima, poput biopsije, liječnik će vam unaprijed dati potrebne upute.

Kako funkcionira PCR tehnologija?

U redu, sada da vidimo kako ova nevjerojatna tehnologija zapravo funkcionira. Ovo je malo znanstveno, ali objasnit ću to jednostavno.

1. Priprema uzorka: Prvo se iz uzorka (krv, sekreti itd.) uzetog od vas izolira DNK ili RNK.

2. Izrada smjese: Zatim se ova izolirana DNK/RNK miješa s nekim posebnim kemikalijama. Glavna stvar u ovoj smjesi je enzim koji se zove DNK polimeraza . To je glavni enzim koji obavlja posao fotokopiranja.

3. Ciklus zagrijavanja i hlađenja: Sada se mala cijev s ovom smjesom stavlja u poseban stroj. Ovaj stroj vrlo brzo podiže i snižava temperaturu.

• Denaturacija: Prvo se temperatura povisuje na oko 95 stupnjeva Celzija. To uzrokuje odvajanje dvaju lanaca DNK.
• Žarenje: Zatim se temperatura snižava na oko 14 stupnjeva. Nakon toga se na odvojene lance DNA pričvršćuju mali komadići DNA (primeri) koji odgovaraju fragmentu DNA koji tražimo.
• Ponovno zagrijavanje (ekstenzija): Zatim se temperatura povisi na oko 22 stupnja Celzija. Tada nastupa enzim DNA polimeraza i stvara novi lanac DNA iz tog primera koji odgovara izvornom lancu DNA.

4. Kopiranje: Sada su napravljene dvije kopije jednog lanca DNK. Ovaj temperaturni ciklus ponavlja se oko 30-40 puta. U jednom ciklusu, količina DNK se udvostručuje. Dvije postaju četiri, četiri postaju osam, osam postaje šesnaest... Nakon otprilike 30 ciklusa, od izvornog jednog komadića DNK napravljeno je više od milijardu kopija.

Sada je taj fragment DNK/RNK, koji je prije bio premalen za detekciju, postao dovoljno velik da se lako detektira.

Postoje li vrste PCR testova?

Da, postoje uglavnom dvije vrste kojih moramo biti svjesni.

• PCR s reverznom transkriptazom (RT-PCR): Neki virusi, poput Covida, gripe i HIV-a, imaju svoje genetske informacije u RNA, a ne u DNA. Normalna PCR može kopirati samo DNA. Dakle, ono što radite u RT-PCR-u jest da prvo koristite poseban enzim ("reverzna transkriptaza") za "pretvaranje" te RNA u DNA. Rezultirajuća DNA naziva se komplementarna DNA (cDNA). Zatim se odvija normalan PCR proces.

• PCR u stvarnom vremenu / Kvantitativna PCR (Q-PCR): Ovo je nešto naprednija metoda. U njoj se događa da se, kako se DNK kopira, na nju veže fluorescentna oznaka. Kako se količina kopirane DNK povećava, povećava se i ova fluorescencija. Uređaj može mjeriti ovu fluorescenciju. Dakle, dok čekamo, odnosno u stvarnom vremenu , možemo vidjeti je li relevantna DNK prisutna u uzorku ili ne. Ne samo to, već može dati i okvirnu predodžbu o tome koliko je virusa bilo u izvornom uzorku (virusno opterećenje). RT-PCR test u stvarnom vremenu koji kombinira obje ove metode često se koristi za otkrivanje Covida.

Što znači PCR nalaz?

Vrlo je važno razumjeti PCR izvješće kada ga primite.

• Otkriveno / Pozitivno: Ako u vašem izvješću piše "Otkriveno" ili "Pozitivno", to znači da je vaš uzorak sadržavao dijelove virusa ili genetskog materijala koji su tražili. Jednostavno rečeno, vjerojatno imate infekciju.

• Nije otkriveno / Negativno: To znači da relevantni fragmenti DNK/RNK nisu pronađeni u testiranom uzorku. To znači da najvjerojatnije nemate tu infekciju.

Koliko je vremena potrebno za dobivanje rezultata varira ovisno o testu koji se provodi. Brisevi nosa (poput COVID-a, gripe) obično daju rezultate unutar 24 sata. Međutim, krvne pretrage i biopsije za traženje genetskih bolesti mogu potrajati tjedan dana ili više.

Ako imate bilo kakvih pitanja ili nedoumica u vezi s PCR testom ili njegovim rezultatima, svakako razgovarajte o tome sa svojim liječnikom.