എന്താണ് പിസിആർ ടെസ്റ്റ്? നമുക്ക് അതിനെക്കുറിച്ച് ലളിതമായി സംസാരിക്കാം!

PCR എന്ന വാക്ക് കേൾക്കുമ്പോൾ നമ്മൾ കോവിഡ് പാൻഡെമിക്കിനെക്കുറിച്ചാണ് ഓർമ്മ വരുന്നത്, അല്ലേ? മൂക്കിൽ ഒരു സ്വാബ് തിരുകി റിപ്പോർട്ട് വരുന്നതുവരെ കാത്തിരിക്കേണ്ടി വന്ന കാലം... അത് ഒരിക്കലും മറക്കില്ല. എന്നാൽ PCR കോവിഡ് കണ്ടെത്താൻ മാത്രമല്ല ഉപയോഗിക്കുന്നതെന്ന് നിങ്ങൾക്കറിയാമോ? ഇത് യഥാർത്ഥത്തിൽ മെഡിക്കൽ സയൻസിൽ വലിയൊരു വഴിത്തിരിവ് സൃഷ്ടിച്ച വളരെ പ്രധാനപ്പെട്ട ഒരു പരിശോധനയാണ്. അപ്പോൾ ഇന്ന്, ഈ PCR ടെസ്റ്റ് എന്താണെന്നും ഇതിന് മറ്റ് എന്തൊക്കെ കാര്യങ്ങൾ കണ്ടെത്താനാകുമെന്നും അത് എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കുന്നുവെന്നും നിങ്ങൾക്ക് മനസ്സിലാകുന്ന ലളിതമായ രീതിയിൽ സംസാരിക്കാം.

എന്താണ് PCR?

ശരി, നമുക്ക് ഇത് ഇങ്ങനെ പറയാം. ഒരു വലിയ ലൈബ്രറിയിലെ ആയിരക്കണക്കിന് പുസ്തകങ്ങളിൽ നിന്ന്, ഒരു പുസ്തകത്തിന്റെ ഒരു പേജിൽ നിന്ന് ഒരൊറ്റ വാക്ക് കണ്ടെത്തേണ്ടി വന്നുവെന്ന് സങ്കൽപ്പിക്കുക. അത് എത്ര ബുദ്ധിമുട്ടായിരിക്കും? നമ്മുടെ ശരീരത്തിലെ കോശങ്ങൾക്കുള്ളിലെ ജനിതക വസ്തുവായ ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎയുടെ ഒരു ചെറിയ കഷണം കണ്ടെത്തുന്നത് പോലെയാണ് ഇത്.

PCR (പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ) സാങ്കേതികവിദ്യ ആ ബുദ്ധിമുട്ടുള്ള ജോലി എളുപ്പമാക്കുന്നു. നമ്മൾ തിരയുന്ന DNA അല്ലെങ്കിൽ RNA യുടെ ഏറ്റവും ചെറിയ കഷണം ലക്ഷക്കണക്കിന്, ദശലക്ഷക്കണക്കിന് തവണ പോലും പകർത്തുക എന്നതാണ് ഇത് ചെയ്യുന്നത് (ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ). ലൈബ്രറി പുസ്തകത്തിൽ വാക്കുള്ള പേജ് കണ്ടെത്തി, ഒരു ഫോട്ടോകോപ്പി മെഷീനിൽ ഇട്ട്, ഏകദേശം ഒരു ദശലക്ഷം പകർപ്പുകൾ ഉണ്ടാക്കുന്നത് പോലെയാണ് ഇത്. പിന്നെ, കണ്ടെത്താൻ പ്രയാസമുള്ള ആ വാക്ക് ഇപ്പോൾ എല്ലായിടത്തും ഉള്ളതിനാൽ, നമുക്ക് അത് എളുപ്പത്തിൽ തിരിച്ചറിയാൻ കഴിയും.

ലളിതമായി പറഞ്ഞാൽ, നമ്മുടെ ശരീരത്തിലെ ഒരു കോശത്തിന്റെ വളരെ ചെറിയ അളവ്, ഒരു തുള്ളി രക്തം, അല്ലെങ്കിൽ ഒരു മൂക്കിലെ സ്വാബ് എന്നിവ എടുത്ത്, അതിൽ ഒരു പ്രത്യേക ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ കഷണം കൃത്രിമമായി വളർത്തി, അത് നമ്മുടെ സാമ്പിളിൽ ഉണ്ടോ ഇല്ലയോ എന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുന്ന ഒരു പരിശോധനയാണ് പിസിആർ. ഇത് വളരെ സെൻസിറ്റീവ് ആയ ഒരു പരിശോധനയാണ്. അതായത്, വൈറസിന്റെ വളരെ ചെറിയ അളവിൽ പോലും ഇതിന് കണ്ടെത്താൻ കഴിയും. ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെസ്റ്റ് (NAAT) എന്നറിയപ്പെടുന്ന ഒരു കൂട്ടം പരിശോധനകളിൽ പെടുന്നതാണ് ഈ രീതി.

പിസിആർ പരിശോധനയിലൂടെ ഏതൊക്കെ രോഗങ്ങൾ കണ്ടെത്താനാകും?

കോവിഡ് മഹാമാരി കാരണം പിസിആർ പ്രചാരത്തിലായെങ്കിലും, പതിറ്റാണ്ടുകളായി വൈദ്യശാസ്ത്ര ലോകത്ത് ഇത് ഉപയോഗിച്ചുവരുന്നു. ഈ പരിശോധനയിലൂടെ കണ്ടെത്താൻ കഴിയുന്ന നിരവധി കാര്യങ്ങളുണ്ട്. അവയിൽ ചില പ്രധാന കാര്യങ്ങൾ നോക്കാം.

പിസിആർ പരിശോധനയ്ക്കായി സാമ്പിൾ എങ്ങനെയാണ് എടുക്കുന്നത്?

പിസിആർ പരിശോധനയ്ക്കായി നിങ്ങൾ ഒരു സാമ്പിൾ എടുക്കുന്ന രീതി നിങ്ങൾ ഏതുതരം രോഗമാണ് അന്വേഷിക്കുന്നത് എന്നതിനെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു. ഓരോ അവസ്ഥയ്ക്കും സാമ്പിൾ എടുക്കുന്ന രീതി വ്യത്യസ്തമാണ്.

മിക്കപ്പോഴും, പിസിആർ പരിശോധനയ്ക്ക് തയ്യാറെടുക്കാൻ നിങ്ങൾ പ്രത്യേകമായി ഒന്നും ചെയ്യേണ്ടതില്ല. എന്നിരുന്നാലും, ചില സന്ദർഭങ്ങളിൽ, ബയോപ്സി പോലുള്ള എന്തെങ്കിലും ചെയ്യുമ്പോൾ, നിങ്ങളുടെ ഡോക്ടർ നിങ്ങൾക്ക് ആവശ്യമായ നിർദ്ദേശങ്ങൾ മുൻകൂട്ടി നൽകും.

പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യ എങ്ങനെയാണ് പ്രവർത്തിക്കുന്നത്?

ശരി, ഇനി ഈ അത്ഭുതകരമായ സാങ്കേതികവിദ്യ എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കുന്നുവെന്ന് നോക്കാം. ഇത് അൽപ്പം ശാസ്ത്രീയമാണ്, പക്ഷേ ഞാൻ ഇത് ലളിതമായി വിശദീകരിക്കാം.

1. സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കൽ: ആദ്യം, നിങ്ങളിൽ നിന്ന് എടുക്കുന്ന സാമ്പിളിൽ നിന്ന് (രക്തം, സ്രവങ്ങൾ മുതലായവ) ഡിഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നു.

2. മിശ്രിതം ഉണ്ടാക്കൽ: അടുത്തതായി, ഈ ഒറ്റപ്പെട്ട DNA/RNA ചില പ്രത്യേക രാസവസ്തുക്കളുമായി കലർത്തുന്നു. ഈ മിശ്രിതത്തിലെ പ്രധാന കാര്യം DNA പോളിമറേസ് എന്ന എൻസൈമാണ്. ഫോട്ടോകോപ്പി ജോലി ചെയ്യുന്ന പ്രധാന എൻസൈമാണിത്.

3. ചൂടാക്കൽ, തണുപ്പിക്കൽ ചക്രം: ഇപ്പോൾ ഈ മിശ്രിതം അടങ്ങിയ ചെറിയ ട്യൂബ് ഒരു പ്രത്യേക മെഷീനിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു. ഈ മെഷീൻ വളരെ വേഗത്തിൽ താപനില ഉയർത്തുകയും താഴ്ത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.

• ഡിനാറ്ററേഷൻ: ആദ്യം, താപനില ഏകദേശം 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസായി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. ഇത് രണ്ട് ഡിഎൻഎ സ്ട്രോണ്ടുകളെ വേർപെടുത്താൻ കാരണമാകുന്നു.
• അനിയലിംഗ്: അടുത്തതായി, താപനില ഏകദേശം 55 ഡിഗ്രിയിലേക്ക് താഴ്ത്തുന്നു. തുടർന്ന്, നമ്മൾ തിരയുന്ന ഡിഎൻഎ ഭാഗവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ചെറിയ ഡിഎൻഎ കഷണങ്ങൾ (പ്രൈമറുകൾ) വേർതിരിച്ച ഡിഎൻഎ സ്ട്രോണ്ടുകളിൽ ഘടിപ്പിക്കുന്നു.
• വീണ്ടും ചൂടാക്കൽ (വിപുലീകരണം): പിന്നീട് താപനില ഏകദേശം 72 ഡിഗ്രിയിലേക്ക് ഉയർത്തുന്നു. തുടർന്ന് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് എൻസൈം വന്ന് ആ പ്രൈമറിൽ നിന്ന് യഥാർത്ഥ ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഒരു പുതിയ ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡ് നിർമ്മിക്കുന്നു.

4. പകർത്തൽ: ഇപ്പോൾ ഒരു ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡിന്റെ രണ്ട് പകർപ്പുകൾ നിർമ്മിച്ചു. ഈ താപനില ചക്രം ഏകദേശം 30-40 തവണ ആവർത്തിക്കുന്നു. ഒരു ചക്രത്തിൽ, ഡിഎൻഎയുടെ അളവ് ഇരട്ടിയാകുന്നു. രണ്ട് നാലായി മാറുന്നു, നാല് എട്ടായി മാറുന്നു, എട്ട് പതിനാറായി മാറുന്നു... ഏകദേശം 30 ചക്രങ്ങൾക്ക് ശേഷം, ഡിഎൻഎയുടെ യഥാർത്ഥ ഒറ്റ കഷണത്തിൽ നിന്ന് ഒരു ബില്യണിലധികം പകർപ്പുകൾ നിർമ്മിക്കപ്പെട്ടു.

മുമ്പ് കണ്ടുപിടിക്കാൻ കഴിയാത്തത്ര ചെറുതായിരുന്ന ആ ഡിഎൻഎ/ആർഎൻഎ ശകലം ഇപ്പോൾ എളുപ്പത്തിൽ കണ്ടുപിടിക്കാൻ കഴിയുന്നത്ര വലുതായി മാറിയിരിക്കുന്നു.

PCR പരിശോധനകൾ ഏതെങ്കിലും തരത്തിലുണ്ടോ?

അതെ, നമ്മൾ അറിഞ്ഞിരിക്കേണ്ട രണ്ട് തരങ്ങളുണ്ട്.

• റിവേഴ്‌സ്-ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്റ്റേസ് പിസിആർ (ആർടി-പിസിആർ): കോവിഡ്, ഇൻഫ്ലുവൻസ, എച്ച്ഐവി തുടങ്ങിയ ചില വൈറസുകളുടെ ജനിതക വിവരങ്ങൾ ഡിഎൻഎയിലല്ല, ആർഎൻഎയിലാണ്. സാധാരണ പിസിആറിന് ഡിഎൻഎ പകർത്താൻ മാത്രമേ കഴിയൂ. അതിനാൽ, ആർടി-പിസിആറിൽ നിങ്ങൾ ചെയ്യുന്നത് ആദ്യം ഒരു പ്രത്യേക എൻസൈം (`റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്റ്റേസ്`) ഉപയോഗിച്ച് ആ ആർഎൻഎയെ ഡിഎൻഎയിലേക്ക് 'പരിവർത്തനം' ചെയ്യുക എന്നതാണ്. തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന ഡിഎൻഎയെ കോംപ്ലിമെന്ററി ഡിഎൻഎ (സിഡിഎൻഎ) എന്ന് വിളിക്കുന്നു. തുടർന്ന് സാധാരണ പിസിആർ പ്രക്രിയ നടക്കുന്നു.

• റിയൽ-ടൈം പിസിആർ / ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ (ക്യു-പിസിആർ): ഇത് കുറച്ചുകൂടി പുരോഗമിച്ച ഒരു രീതിയാണ്. ഇതിൽ സംഭവിക്കുന്നത്, ഡിഎൻഎ പകർത്തുമ്പോൾ, അതിൽ ഒരു ഫ്ലൂറസെന്റ് ലേബൽ ഘടിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു എന്നതാണ്. പകർത്തുന്ന ഡിഎൻഎയുടെ അളവ് കൂടുന്നതിനനുസരിച്ച്, ഈ ഫ്ലൂറസെൻസും വർദ്ധിക്കുന്നു. മെഷീനിന് ഈ ഫ്ലൂറസെൻസ് അളക്കാൻ കഴിയും. അതിനാൽ, നമ്മൾ കാത്തിരിക്കുമ്പോൾ, അതായത്, തത്സമയം , സാമ്പിളിൽ പ്രസക്തമായ ഡിഎൻഎ ഉണ്ടോ ഇല്ലയോ എന്ന് നമുക്ക് കാണാൻ കഴിയും. മാത്രമല്ല, യഥാർത്ഥ സാമ്പിളിൽ എത്ര വൈറസ് ഉണ്ടായിരുന്നു എന്നതിന്റെ (വൈറൽ ലോഡ്) ഏകദേശ ധാരണയും ഇതിന് നൽകാൻ കഴിയും. ഈ രണ്ട് രീതികളും സംയോജിപ്പിക്കുന്ന ഒരു റിയൽ-ടൈം ആർടി-പിസിആർ പരിശോധന പലപ്പോഴും കോവിഡ് കണ്ടെത്തുന്നതിന് ഉപയോഗിക്കുന്നു.

പിസിആർ റിപ്പോർട്ട് എന്താണ് അർത്ഥമാക്കുന്നത്?

ഒരു PCR റിപ്പോർട്ട് ലഭിക്കുമ്പോൾ അത് മനസ്സിലാക്കേണ്ടത് വളരെ പ്രധാനമാണ്.

• കണ്ടെത്തി / പോസിറ്റീവ്: നിങ്ങളുടെ റിപ്പോർട്ടിൽ "കണ്ടെത്തി" അല്ലെങ്കിൽ "പോസിറ്റീവ്" എന്ന് പറഞ്ഞാൽ, നിങ്ങളുടെ സാമ്പിളിൽ വൈറസിന്റെ ഭാഗങ്ങളോ അവർ തിരയുന്ന ജനിതക വസ്തുക്കളോ ഉണ്ടായിരുന്നു എന്നാണ് അർത്ഥമാക്കുന്നത്. ലളിതമായി പറഞ്ഞാൽ, നിങ്ങൾക്ക് അണുബാധയുണ്ടാകാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.

• കണ്ടെത്തിയില്ല / നെഗറ്റീവ്: ഇതിനർത്ഥം പരിശോധിച്ച സാമ്പിളിൽ പ്രസക്തമായ ഡിഎൻഎ/ആർഎൻഎ കഷണങ്ങൾ കണ്ടെത്താൻ കഴിഞ്ഞില്ല എന്നാണ്. അതായത് നിങ്ങൾക്ക് ആ അണുബാധ ഉണ്ടാകാൻ സാധ്യതയില്ല എന്നാണ്.

നടത്തുന്ന പരിശോധനയെ ആശ്രയിച്ച് ഫലങ്ങൾ ലഭിക്കാൻ എത്ര സമയമെടുക്കും എന്നത് വ്യത്യാസപ്പെടുന്നു. നാസൽ സ്വാബുകൾ (കോവിഡ്, ഇൻഫ്ലുവൻസ പോലുള്ളവ) സാധാരണയായി 24 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ഫലങ്ങൾ നൽകുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ജനിതക രോഗങ്ങൾ കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള രക്തപരിശോധനകളും ബയോപ്സികളും ഒരു ആഴ്ചയോ അതിൽ കൂടുതലോ എടുത്തേക്കാം.

ഒരു PCR പരിശോധനയെക്കുറിച്ചോ അതിന്റെ ഫലങ്ങളെക്കുറിച്ചോ നിങ്ങൾക്ക് എന്തെങ്കിലും ചോദ്യങ്ങളോ ആശങ്കകളോ ഉണ്ടെങ്കിൽ, അതിനെക്കുറിച്ച് നിങ്ങളുടെ ഡോക്ടറോട് സംസാരിക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.